RFLP och DNA-analysapplikationer

Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) är en molekylär metod för genetisk analys som gör att individer kan identifieras baserat på unika mönster av restriktionsenzym skärning i specifika regioner av DNA.

Också kallad RFLP-analys drar tekniken fördel av polymorfismer i enskilda människors genetiska koder. Även om alla medlemmar av en art väsentligen har samma genetiska smink, beror dessa små skillnader på variationer i fenotyp, såsom utseende eller metabolism, mellan individer.

RFLP-analysteknik involverar skärning av en viss region i DNA med känd variation, med restriktionsenzymer, sedan separera DNA-fragmenten genom agarosgelelektrofores och bestämma antalet fragment och relativa storlekar.

Ett restriktionsenzym är ett enzym, en proteinmolekyl, som skär DNA på restriktionsställen. I huvudsak bryts DNA-provet upp och digereras av restriktionsenzymerna. De resulterande fragmenten separeras beroende på deras längder, och mönstret för fragmentstorlekar kommer att skilja sig åt för varje testad individ.

Den fullständiga RFLP-processen kräver sondmärkning, DNA-fragmentering, elektrofores, blotting, hybridisering, tvättning och autoradiografi. Detekterade RFLP visualiseras med hjälp av röntgenfilm i autoradiografi, där DNA-fragment kan ses och analyseras efter att de har separerats från varandra genom elektrofores.

Några av applikationerna för RFLP-analys inkluderar:

• DNA-fingeravtryck: Rättsmedicinska forskare kan använda RFLP-analys för att identifiera misstänkta baserat på bevisprov som samlats in vid brottplatser.
• Faderskap: RFLP används också för att bestämma faderskap eller för att spåra förfäder.
• Genetisk mångfald: Tekniken kan användas för att studera utveckling och migration av vilda djur, studera avelsmönster i djurpopulationer och upptäckt och diagnos av vissa sjukdomar.

Tekniken att använda RFLP-detektion av variation i genom är ett viktigt verktyg i genomkartläggning och analys av genetisk sjukdom. Om platsen för en viss sjukdomsgen söks i en viss kromosom, skulle forskare analysera DNA från familjemedlemmar med sjukdomen och leta sedan efter liknande arvsmönster i RFLP alleler.

När en sjukdomsgen är lokaliserad kan genomföra RFLP-analys på andra familjemedlemmar avslöja en bärare av de mutanta generna eller signalera den totala sjukdomsrisken. Det är viktigt att notera att RFLP-tekniken inte används i stor utsträckning nu när nyare och mer robusta tekniker används för DNA-analys inom rättsmedicinsk vetenskap och flera andra områden.

Tyvärr är RFLP-analystekniken tråkig och långsam. Bortsett från att kräva en stor mängd DNA-prov - skulle provet vanligtvis behöva vara ungefär storleken på en fjärdedel, vilket är relativt stort för DNA-prover - processen, från sondmärkning till tvätt och autoradiografi, kan ta upp till en hel månad till komplett.

Resultaten från Human Genome Project har ganska mycket ersatt behovet av RFLP. Projektet möjliggjorde bestämning av hela sekvensen av DNA som finns i mänskliga celler, det mänskliga genomet och för att identifiera alla generna i det mänskliga genomet.