10X TBE elektrofores buffertprotokoll eller recept

TBE och TAE används som buffertar i molekylärbiologi, främst för elektrofores av nukleinsyror. Trisbuffertar används under något grundläggande pH-förhållanden, som för DNA-elektrofores, eftersom detta håller DNA löslig i lösningen och avprotonerad så att den dras till den positiva elektroden och kommer att migrera genom en gel. EDTA är en ingrediens i lösningen eftersom detta vanligt kelateringsmedel skyddar nukleinsyror från nedbrytning med enzymer. EDTA kelaterar tvåvärda katjoner som är kofaktorer för nukleaser som kan förorena provet. Eftersom magnesiumkatjonen är en kofaktor för DNA-polymeras och restriktionsenzymer hålls emellertid koncentrationen av EDTA avsiktligt låg (cirka 1 mM koncentration).

Du behöver inte sterilisera lösningen. Även om nederbörd kan inträffa efter en tidsperiod är stamlösningen fortfarande användbar. Du kan justera pH med en pH-mätare och droppvis tillsätta koncentrat saltsyra (HCl). Det är bra att lagra TBE-buffert vid rumstemperatur, även om du kanske vill filtrera stamlösningen genom ett 0,22 mikron-filter för att ta bort partikel som kan främja utfällning.

instagram viewer

Om du använder en 5X eller 10X lagerlösning av misstag ger du dåliga resultat eftersom lika mycket värme kommer att genereras. Förutom att du ger dålig upplösning kan provet skadas.

Även om TBE och TAE är vanliga elektroforesbuffertar finns det andra alternativ för ledande lösningar med låg molaritet, inklusive litiumboratbuffert och natriumboratbuffert. Problemet med TBE och TAE är att Tris-baserade buffertar begränsar det elektriska fältet som kan användas vid elektrofores eftersom för mycket laddning orsakar en språngstemperatur.

instagram story viewer