Natriumcitratbuffert används ofta för RNA-isolering, eftersom det minimerar bashydrolys av RNA-strängarna, vilket gör det ovärderligt för mRNA-rening under genomiskt forskning och för att studera transkription. Citratbaserade buffertar hjälper också till att detektera antigener i fasta vävnadsberedningar, eftersom de bryter tvärbindningarna som bildas mellan antigenerna och fixeringsmediet.
Med följande enkla steg kan man skapa en natriumcitratbuffert med ett pH på 6 (surt) på under 10 minuter.
Material för natriumcitratbuffert
Få material krävs för att göra natriumcitratbufferten. Med citronsyra behöver man bara 1 M natriumhydroxid, destillerat vatten och en kalibrerad pH-sond. Natriumcitrat är valfritt.
Att göra bufferten kräver också en 1-liters graderad cylinder, en 1-liters volymkolv och tre 1-liters medieflasker. Slutligen behöver du en magnetisk omrörare och en magnetomrörare. Allt detta material finns i skolan, laboratorier på arbetsplatsen eller köpas online eller i specialbutiker.
Två alternativ för att göra bufferten
Det finns två metoder för att göra natriumcitratbuffertar, beroende på vilka material som är tillgängliga för dig.
- Om du har både citronsyra och konjugatbasen, skapa en stamlösning av var och en genom att blanda 21 gram citronsyra i 1 liter destillerat vatten och 29,4 gram natriumcitrat i 1 liter destillerat vatten.
- Om du bara har citronsyra till hands, blanda 2,1 gram i knappt 1 liter destillerat vatten.
Blandning av citronsyra och natriumcitratlösningar
Blanda 82 ml citronsyralösning med 18 ml natriumcitratlösning. Tillsätt tillräckligt destillerat vatten för att bringa blandningens volym till något under 1 liter.
Justera pH
Under omrörning av lösningen med en magnetomrörare, använd 1 M natriumhydroxid för att justera blandningens pH till 6,0. Tillsätt sedan mer destillerat vatten med en volymkolv för att få den slutliga totala volymen av lösningen till exakt 1 liter.