Fosfatbuffrad saltlösning eller PBS-lösning

PBS eller fosfatbuffrad saltlösning är en buffertlösning det är särskilt värdefullt eftersom det efterliknar jonkoncentrationen, osmolariteten och pH hos människokroppsvätskor. Med andra ord, det är isotiskt för mänskliga lösningar, så det är mindre troligt att det orsakar cellskador, toxicitet eller oönskad nederbörd i biologisk, medicinsk eller biokemisk forskning.

Det finns flera recept att förbereda PBS-lösningen. Den väsentliga lösningen innehåller vatten, natriumvätefosfat och natriumklorid. Vissa beredningar innehåller kaliumklorid och kaliumdivätefosfat. EDTA kan också tillsättas i cellulär beredning för att förhindra klumpning.

Fosfatbuffrad saltlösning är inte perfekt för användning i lösningar som innehåller tvåvärda katjoner (Fe²⁺, Zn²⁺) eftersom nederbörd kan förekomma. Vissa PBS-lösningar innehåller emellertid kalcium eller magnesium. Tänk också på att fosfat kan hämma enzymatiska reaktioner. Var särskilt medveten om denna potentiella nackdel när du arbetar med DNA. Medan PBS är utmärkt för fysiologisk vetenskap, måste fosfatet i ett PBS-buffrat prov fälla ut om provet blandas med etanol.

En typisk kemisk sammansättning av 1X PBS har en slutkoncentration av 10 mM PO₄³⁻137 mM NaCl och 2,7 mM KCl. Här är den slutliga koncentrationen av reagens i lösningen:

Beroende på ditt syfte kan du förbereda 1X, 5X eller 10X PBS. Många köper helt enkelt PBS-bufferttabletter, löser dem i destillerat vatten och justerar pH efter behov med saltsyra eller natriumhydroxid. Men det är lätt att göra lösningen från grunden. Här är recept för 1X och 10X fosfatbuffrad saltlösning:

1. Lös upp reagenssalterna i 800 ml destillerat vatten.
2. Justera pH till önskad nivå med saltsyra. Vanligtvis är detta 7,4 eller 7,2. Använd en pH-mätare för att mäta pH, inte pH-papper eller annan opassande teknik.
3. Tillsätt destillerat vatten för att uppnå en slutvolym på 1 liter.

Sterilisering är inte nödvändig för vissa applikationer, men om du steriliserar den, fördela lösningen i alikvoter och autoklav i 20 minuter vid 15 psi (1,05 kg / cm)²) eller använd filtersterilisering.

Fosfatbuffrad saltlösning kan vara förvaras vid rumstemperatur. Det kan också vara kylt, men 5X och 10X lösning kan fällning vid kylning. Om du måste kyla en koncentrerad lösning, förvara den först vid rumstemperatur tills du är säker på att salterna har helt upplösts. Om nederbörden inträffar kommer värmning av temperaturen tillbaka dem till lösning. Hållbarhet för kyld lösning är 1 månad.

10X är en koncentrerad lösning eller stamlösning, som kan späds ut för att skapa en 1X eller normal lösning. En 5X-lösning måste spädas 5 gånger för att göra en normal spädning, medan en 10X-lösning måste spädas 10 gånger.

För att framställa en 1 liters arbetslösning av 1X PBS från en 10X PBS-lösning, tillsätt 100 ml av 10X-lösningen till 900 ml vatten. Detta ändrar endast koncentrationen av lösningen, inte gram eller molär mängd av reagensen. PH bör inte påverkas.

En annan populär buffertlösning är Dulbeccos fosfatbuffrade saltlösning eller DPBS. DPBS, liksom PBS, används för biologisk forskning och buffertar inom pH-området 7,2 till 7,6. Det kan förvaras vid rumstemperatur. Dulbeccos lösning innehåller en lägre koncentration av fosfat. Det är 8,1 mM mM fosfatjoner, medan vanliga PBS är 10 mM fosfat. Receptet för 1x DPBS är:

Lös upp salterna i 800 ml vatten. Justera pH till 7,2 till 76 med saltsyra. Justera den slutliga volymen till 1000 ml med vatten. Autoklav vid 121 ° C i 20 minuter.

• Dulbecco, R.; et al. (1954). "Plackbildning och isolering av rena linjer med poliomyelitvirus". J. Exp. Med. 99 (2): 167–182.
• "Fosfatbuffrad saltlösning (PBS." Cold Spring Harbor Protocols (2006). Cold Spring Harbour Laboratory Press.