Hur man gör fosfatbuffrad saltlösning (PBS)

Fosfatbuffrad saltlösning (PBS) är en buffert-lösning som ofta används för immunhistokemisk färgning (IHC) och används ofta i biologisk forskning. PBS är en vattenbaserad saltlösning som innehåller natriumvätefosfat, natriumklorid och i vissa fall kaliumklorid och kaliumdivätefosfat.

Immunohistokemi refererar till processen för att upptäcka antigener såsom proteiner i cellerna i a vävnadssektion genom att använda principen om antikroppar som binder specifikt till antigen i biologiska vävnader. Immunofluorescerande färgning var den första immunohistokemiska färgningsmetoden.

Antigener blir synliga när de är konjugerade med antikroppar med fluorescensfärgämnen på grund av en antigen-antikroppsbindningsreaktion. Denna process sker när den aktiveras av spännande ljus med en specifik våglängd under ett lysrörsmikroskop.

Osmolaritet och jonkoncentrationer i lösningarna matchar människokroppen - de är isotiska.

Du kan förbereda PBS på flera sätt. Det finns flera formler. Vissa av dem innehåller inte kalium, medan andra innehåller kalcium eller

Det här receptet är relativt enkelt. Det är för 10X PBS lagerlösning (0.1M). Du kan emellertid också skapa en 1X lagerlösning, eller börja med detta 10X-recept och späda det till 1X. Hela processen tar cirka 10 minuter och ett alternativ för att lägga till Tween finns också.

• Natriumfosfat monobasiskt (vattenfritt)
• Natriumfosfat dibasiskt (vattenfritt)
• Natriumklorid
• Skala och väga båtar
• Magnetisk omrörare och omrörare
• En pH-sond som är kalibrerad och lämpliga lösningar för att justera pH
• 1L mätkolv
• Tween 20 (valfritt)

1. Väg 10,9 g vattenfri natriumfosfat dibasisk (Na2HPO4), 3,2 g vattenfri natriumfosfat monobasisk (NaH2PO4) och 90 g natriumklorid (NaCl). Lös upp i knappt 1 liter destillerat vatten.
2. Justera pH till 7,4 och gör lösningen till en slutvolym på 1L.
3. Späd 10X före användning och justera pH vid behov.
4. Du kan skapa en PBS-lösning som innehåller 0,5 procent Tween 20 genom att tillsätta 5 ml Tween 20 till 1L-lösningen.

Förvara bufferten vid rumstemperatur efter att du har gjort PBS-lösningen.

Icke-vattenfria reagens kan ersättas men du måste beräkna lämplig massa för var och en för att rymma de tillsatta vattenmolekylerna.

Fosfatbuffrad saltlösning har många användningsområden eftersom den är isotonisk och giftfri för de flesta celler. Det kan användas för att späda ämnen och det används ofta för att skölja behållare med celler. PBS kan användas som ett utspädningsmedel i olika metoder för att torka biomolekyler eftersom vattenmolekylerna i den kommer att vara strukturerade kring ämnet - till exempel protein. Det "torkas" och immobiliseras till en fast yta.

PH förblir stabilt och konsekvent för att förhindra förstörelse av celler.

Den tunna vattenfilmen som binder till ämnet förhindrar denaturering eller andra förändringar i konformationen. Karbonatbuffertar kan användas för samma ändamål men med mindre effektivitet.

PBS kan också användas för att ta ett referensspektrum vid mätning av protein adsorption i ellipsometri.