TAE-buffert är en lösning som består av Tris-bas, ättiksyra och EDTA (Tris-acetat-EDTA). Det är historiskt sett den vanligaste bufferten som används för agarosgel elektrofores i analyserna av DNA-produkter som härrör från PCR förstärkning, DNA reningprotokoll eller DNA-kloning experiment.
Denna buffert har låg jonstyrka och låg buffringskapacitet. Det är bäst lämpat för elektrofores av stora (> 20 kilobaser) DNA-bitar och måste bytas ut ofta eller återcirkuleras under längre (> 4 timmar) gelkörningstider. Med det i åtanke kanske du vill överväga att göra flera partier av bufferten.
Med tanke på att bufferten är lätt att göra och stegen kan genomföras snabbt, bör mer än en sats i taget inte vara särskilt tidskrävande eller svårt. Med anvisningarna nedan bör det ta bara 30 minuter att ta TAE-bufferten.
Vad du behöver för TAE-bufferten
Eftersom tillverkning av TAE-bufferten bara kräver en snabb och enkel uppsättning instruktioner, är antalet material som behövs för det inte överdrivet. Du behöver bara EDTA (etylendiaminetetraättiksyra) dinatriumsalt, Tris-bas och isättika.
Att göra bufferten kräver också en pH-mätare och kalibreringsstandarder, när så är lämpligt. Du behöver också 600 ml och 1500 ml bägare eller kolvar samt graderade cylindrar. Slutligen behöver du avjoniserat vatten, rörstänger och omrörningsplattor.
I följande instruktioner förkortas formelens vikt (varje elementets atommassa med antalet atomer, sedan läggs massan för var och en till FW).
Förbered en lagerlösning av EDTA
En EDTA-lösning förbereds i förväg. EDTA kommer inte att gå helt in i en lösning förrän pH justeras till cirka 8,0. För en 500-milliliter lager lösning av 0,5 M (molaritet eller koncentration) EDTA, väga 93,05 gram EDTA-dinatriumsalt (FW = 372,2). Lös upp det i 400 ml avjoniserat vatten och justera pH med natriumhydroxid (NaOH). Fyll på lösningen till en slutvolym på 500 ml.
Skapa din lagerlösning
Gör en koncentrerad (50x) stamlösning av TAE genom att väga ut 242 gram Tris-bas (FW = 121.14) och lösa den i ungefär 750 ml avjoniserat vatten. Tillsätt försiktigt 57,1 ml is-syra och 100 ml 0,5 M EDTA (pH 8,0).
Justera därefter lösningen till en slutvolym på 1 liter. Denna lagerlösning kan lagras vid rumstemperatur. PH för denna buffert justeras inte och bör vara cirka 8,5.
Förbered en arbetslösning av TAE-buffert
Arbetslösningen för 1x TAE-buffert framställs genom att helt enkelt späda stamlösningen med 50x i avjoniserat vatten. Slutliga lösta koncentrationer är 40 mM (millimolar) Tris-acetat och 1 mM EDTA. Bufferten är nu klar för användning vid körning av en agarosgel.
Avslutar
Kontrollera inventeringen innan du börjar se till att du har alla ovanstående material för TAE-bufferten. Din leverantör bör kunna berätta om de har alla föremål du behöver på lager. Du vill inte hamna något i mitten av proceduren.